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細(xì)胞信息：

WiDr人結(jié)腸癌細(xì)胞，直接來源于ATCC，公司海外直接購買，未經(jīng)代理，細(xì)胞真實(shí)。購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，進(jìn)口來源，質(zhì)量保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。

細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。對(duì)細(xì)胞的真實(shí)性，支持客戶鑒定STR或者基因突變測序數(shù)據(jù)，如證明細(xì)胞錯(cuò)誤，全額退款。

產(chǎn)品形式：

公司提供2種形式的產(chǎn)品：

1種是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，-80C也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；再者干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。

第2種是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。

默認(rèn)是發(fā)第2種，如果想要1種，需事先告知。

購買流程：

1.客戶確定訂購；

2.公司將合同發(fā)給客戶簽字（電子版或者紙質(zhì)版），同時(shí)快遞發(fā)票給客戶；

3.由客戶報(bào)銷費(fèi)用到公司賬戶。

4.報(bào)賬過程中，我公司將復(fù)蘇細(xì)胞，做QC。

5.QC通過，同時(shí)費(fèi)用到賬，即可發(fā)貨給客戶（順豐）。

WiDr人結(jié)腸癌細(xì)胞 培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱，放置4小時(shí)，使細(xì)胞回到正常溫度。

2.將培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基用移液管吸到另一無菌瓶內(nèi)，培養(yǎng)瓶內(nèi)保留5-6ml培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)至少24小時(shí)方可傳代，吸出的培養(yǎng)基4度保存（如吸出培養(yǎng)基有較多碎片，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘，取上清保存），用于后續(xù)培養(yǎng)。強(qiáng)烈建議您使用吸出培養(yǎng)基培養(yǎng)至少2-3代，并在更換新培養(yǎng)基前凍存幾支細(xì)胞。

3.如有Greiner細(xì)胞培養(yǎng)瓶，可取一個(gè)新的T25 flask，取其瓶蓋，更換原培養(yǎng)瓶的瓶蓋。如使用原瓶蓋，則需要稍稍擰松瓶蓋，使氣體能夠進(jìn)入。

4.37度培養(yǎng)至少24小時(shí)，當(dāng)細(xì)胞密度符合傳代要求時(shí)，PBS清洗細(xì)胞，加入1ml胰酶，消化細(xì)胞傳代。當(dāng)80%以上細(xì)胞培養(yǎng)瓶輕輕晃動(dòng)能脫落時(shí)，加培養(yǎng)基終止消化，吹打成單細(xì)胞，吸入15ml離心管，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

5.離心后棄上清，加入新培養(yǎng)基吹打重懸細(xì)胞成單細(xì)胞，加入新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

6.用吸出培養(yǎng)基傳2-3代后請(qǐng)及時(shí)凍存細(xì)胞。

貼壁細(xì)胞凍存方法:

每個(gè)T75 或10cm培養(yǎng)皿的細(xì)胞消化離心后棄上清。加2ml細(xì)胞凍存液(90% FBS+10%DMSO),吹打均勻, 加入2個(gè)細(xì)胞凍存管。立即放入細(xì)胞凍存盒（Nalgene 5100-0001），加異丙醇到刻度線，放-80度冰箱。24小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)到液氮中長期保存。